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식물 유전체 DNA 추출 및 형질전환 식물 선별2025.11.121. 식물 유전체 DNA 추출 식물 세포로부터 유전체 DNA를 분리하고 정제하는 과정입니다. 식물 조직을 분쇄하여 세포벽을 파괴한 후, 적절한 완충액과 효소를 사용하여 DNA를 추출합니다. 추출된 DNA는 에탄올 침전을 통해 정제되며, 최종적으로 고순도의 유전체 DNA를 얻을 수 있습니다. 이는 분자생물학 실험의 기초가 되는 중요한 기술입니다. 2. T-DNA 유전형 분석 T-DNA는 아그로박테리움 투메파시엔스에서 식물 세포로 전달되는 DNA 영역입니다. T-DNA 유전형 분석은 PCR 기법을 이용하여 형질전환 식물에 T-DNA가 ...2025.11.12
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식물분자생물학실험 Agrobacterium 매개 식물 형질전환 예비보고서2025.01.181. Agrobacterium 매개 식물 형질전환 Agrobacterium을 매개체로 활용하여, 식물에 유전자를 도입하여 형질전환하는 방법에 대하여 학습한다. 유전적 형질전환이란 수용자 세포가 외부 유전물질을 받아들여 자신의 유전정보에 도입하는 과정을 통해 유전자의 변환이 일어나는 현상을 말한다. 식물의 유전자를 변형시키기 위한 방법으로 가장 널리 활용되고 있는 방법은 Agrobacterium 매개 형질전환이다. Agrobacterium tumefaciens는 다수의 외떡잎 혹은 쌍떡잎 속씨식물들과 겉씨식물에 DNA를 전달할 수 있...2025.01.18
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식물분자생물학실험 Plant Transformation 결과보고서2025.01.181. Floral-dipping method Floral-dipping method는 Arabidopsis를 간단하게 형질 전환하는 방법 가운데 하나이며 1993년 Bechtold et al.(1)의 논문을 통하여 제안되었다. 이 방식은 대부분의 형질 전환된 자손에서 유전적 균일성을 확보할 수 있으며, 조직 배양 및 재생과 관련된 체세포 변이가 최소화된다는 장점이 있다. 이 방법의 주요 단점은 단 하나의 식물 종인 Arabidopsisthaliana에 대해서만 정상적으로 작용한다는 것으로, 다른 식물종에 이 방식을 활용하지못한다는 ...2025.01.18
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GUS staining 실험 분석 및 결과 해석2025.11.121. GUS staining (β-glucuronidase staining) GUS staining은 식물 생명과학 실험에서 유전자 발현을 시각화하는 기법입니다. β-glucuronidase 효소가 X-Gluc 기질과 반응하여 파란색 침전물을 생성하므로, 특정 유전자가 발현되는 조직과 세포를 정확하게 관찰할 수 있습니다. 이 방법은 식물의 발달 과정, 호르몬 반응, 환경 스트레스 반응 등을 연구하는 데 널리 사용됩니다. 2. 유전자 발현 분석 (Gene Expression Analysis) GUS staining을 통해 식물 조직에...2025.11.12
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식물분자생물학실험 Colony PCR 결과보고서2025.01.181. Colony PCR Colony PCR은 형질 전환 후 selective media에서 성장한 박테리아의 colony를 신속하게 screening하여 원하는 유전자가 존재하는지 확인하는 PCR 검사 기법입니다. PCR 반응 과정에서 heating step이 존재하기 때문에 대부분의 형질전환체는 lysis되어 유전물질을 방출하게 되고, 이때 방출된 유전물질을 template으로 활용하여 amplification reaction을 진행합니다. Positive Control과 Negative Control은 PCR 반응의 정확성과 ...2025.01.18
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식물분자생물학실험Arabidopsis seed sterilization and germination 결과보고서2025.01.181. Arabidopsis seed sterilization and germination 본 실험에서는 형질전환된 Arabidopsis seed 를 70% ethanol과 10% NaClO 희석액을 이용해 소독하여 종자 표면의 미생물 오염원을 제거하고, 항생제가 투입된 media에서 발아시켜 형질전환체를 선별하는 과정을 진행하였다. 실험 결과, 다수의 종자가 정상적으로 발아되었고, 배지에서 오염원에 의한 contamination이 관찰되지 않았다. 이는 70% ethanol과 10% NaClO 희석액이 식물 종자 표면의 오염원을 정...2025.01.18
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식물분자생물학실험 Agrobacterium Transformation 결과보고서2025.01.181. Agrobacterium competent cell (GV3101) GV3101은 Agrobacterium tumefaciens Chemically Competent Cell의 일종으로, 애기장대, 담배, 옥수수, 감자 등의 식물을 형질 전환하는데 사용될 수 있다. 여기에는 screening을 위한 rifampicin resistant gene (rif)이 미리 포함되어 있으며, gentamicin resistance gene 과 vir gene을 포함한 Ti plasmid를 운반할 수 있다. 2. Freeze-Thaw met...2025.01.18
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식물분자생물학실험 Histochemical GUS assay 결과보고서2025.01.181. GUS assay GUS assay는 Escherichia coli β-glucuronidase gene uidA (GUS)를 식물에서 reporter gene으로 활용하는 방법으로, 형광 측정, 분광 광도 측정 또는 조직화학적 기술을 통해 목적 유전자의 발현 위치를 확인할 수 있다. GUS assay는 높은 감도, 효소 안정성, 단순성으로 인해 자주 활용되며, 특히 histochemical staining을 통해 endogenous promoter activity를 관찰하는데 유용하다. 2. GUS 염색 원리 GUS assa...2025.01.18
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DNA 연결 및 형질전환 실험 결과2025.11.131. DNA Ligation (DNA 연결) DNA 연결은 DNA 단편들을 DNA 리가제 효소를 이용하여 공유결합으로 연결하는 분자생물학 기법입니다. 이 과정에서 플라스미드와 목적 유전자의 양 끝에 있는 인산디에스터 결합을 형성하여 재조합 DNA를 만듭니다. 적절한 온도와 시간 조건에서 수행되며, 연결 효율은 DNA 농도, 리가제 양, 반응 시간 등에 영향을 받습니다. 2. Transformation (형질전환) 형질전환은 재조합 DNA를 숙주 세포(주로 박테리아)에 도입하는 과정입니다. 화학적 형질전환이나 전기천공법 등의 방법으로...2025.11.13
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DNA 연결 및 형질전환 실험 예비2025.11.131. DNA Ligation (DNA 연결) DNA 연결은 DNA ligase 효소를 이용하여 두 개의 DNA 분자를 공유결합으로 연결하는 과정입니다. 제한효소로 절단된 DNA의 5' 인산기와 3' 수산기 사이의 포스포디에스터 결합을 형성하여 DNA 분자를 연결합니다. 이 과정은 재조합 DNA 기술에서 벡터와 삽입 DNA를 연결하는 데 필수적인 단계입니다. 2. Transformation (형질전환) 형질전환은 외부에서 도입된 DNA가 세포 내로 들어가 세포의 유전자형을 변화시키는 과정입니다. 박테리아의 경우 화학적 방법이나 전기천...2025.11.13
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