총 151개
-
분자생물학실험 Gene cloning_TAE buffer 제작2025.04.271. TAE buffer 제작 TAE buffer 제작(30ml 50X TAE buffer)의 목적, 재료, 방법 등을 자세히 설명하고 있습니다. TAE buffer는 DNA 전기영동에 사용되는 완충액으로, Tris, acetic acid, EDTA 성분으로 구성됩니다. 제작 방법은 각 성분의 양을 계산하여 증류수와 혼합하고 멸균하는 과정으로 이루어집니다. 2. PCR(중합효소 연쇄반응) PCR은 DNA 증폭 기술로, DNA 중합효소를 사용하여 원하는 DNA 염기서열을 대량으로 증폭시킬 수 있습니다. PCR에 필요한 주요 요소는 주...2025.04.27
-
아가로스겔 전기영동을 이용한 플라스미드 클로닝 확인2025.11.151. 아가로스겔 전기영동 Restriction digestion 및 uncut plasmid를 통해 클로닝 여부를 확인하는 실험 방법입니다. 아가로스겔을 이용하여 DNA 샘플을 전기영동으로 분리하고, band shift 및 insert 유무를 관찰하여 클로닝 성공 여부를 판단합니다. 1X TAE buffer에 아가로스를 녹여 겔을 만들고, EtBr을 첨가한 후 DNA 샘플을 로딩하여 110V에서 전기영동을 수행합니다. 2. 플라스미드 클로닝 검증 Restriction digestion으로 처리된 DNA와 uncut plasmid를 ...2025.11.15
-
DNA 연결 및 형질전환 실험 결과2025.11.131. DNA Ligation (DNA 연결) DNA 연결은 DNA 단편들을 DNA 리가제 효소를 이용하여 공유결합으로 연결하는 분자생물학 기법입니다. 이 과정에서 플라스미드와 목적 유전자의 양 끝에 있는 인산디에스터 결합을 형성하여 재조합 DNA를 만듭니다. 적절한 온도와 시간 조건에서 수행되며, 연결 효율은 DNA 농도, 리가제 양, 반응 시간 등에 영향을 받습니다. 2. Transformation (형질전환) 형질전환은 재조합 DNA를 숙주 세포(주로 박테리아)에 도입하는 과정입니다. 화학적 형질전환이나 전기천공법 등의 방법으로...2025.11.13
-
제한효소를 이용한 DNA 절단 및 전기영동 분석2025.11.171. 제한효소(Restriction Enzyme) 제한효소는 주로 세균이 보유한 DNA 절단 효소로, 외부 바이러스의 DNA를 절단하여 자기 보호 기능을 한다. 종류에 따라 4개 또는 6개의 염기서열을 인식하여 비점착성 또는 점착성 말단을 생성한다. 같은 효소로 절단된 부위는 동일한 끝을 가지므로, 표적DNA와 플라스미드를 같은 제한효소로 자르고 ligase로 결합시켜 재조합 DNA를 만들 수 있다. DNA 클로닝 등 분자생물학 연구에 광범위하게 사용된다. 2. 전기영동(Electrophoresis) 전기장의 영향으로 전하를 띤 물...2025.11.17
-
제한효소를 이용한 플라스미드 DNA 검증 실험2025.11.151. 제한효소(Restriction Enzyme) 제한효소는 특정 DNA 서열을 인식하여 절단하는 단백질로, 분자생물학 실험에서 DNA 분석 및 조작에 필수적으로 사용된다. 본 실험에서는 EcoR1 제한효소를 사용하여 플라스미드 DNA를 절단하고, 삽입된 DNA의 위치와 크기를 확인하는 데 활용된다. 제한효소는 특정 인식 부위에서만 작용하므로 정확한 DNA 구조 분석이 가능하다. 2. 플라스미드 DNA 검증 Mini-prep 방법으로 획득한 DNA가 실제 플라스미드 DNA인지 확인하는 과정이다. 제한효소를 이용한 제한 소화(Rest...2025.11.15
-
제한효소를 이용한 DNA 절단 및 전기영동 실험2025.11.171. 제한효소(Restriction Enzyme) 제한효소는 DNA를 특정 염기서열에서 절단하는 효소로, 클로닝 벡터와 삽입 DNA의 적절한 제한효소 부위 결정이 중요합니다. 각 제한효소는 서로 다른 특성을 지니며 최적온도(25℃~64℃)와 최적 완충용액 상태에서 절단반응을 수행해야 합니다. 활성단위 1U는 특정 제한효소 자리를 가진 1μg DNA를 1시간 내에 절단할 수 있는 효소의 양입니다. Type I, II, III으로 구분되며, 실험실에서는 주로 특이성이 높은 Type II를 사용합니다. 2. DNA 절단 말단(Sticky...2025.11.17
-
제한효소 처리 실험 및 DNA 절단 분석2025.11.161. 제한효소(Restriction Enzyme) 제한효소는 특정 DNA 염기서열을 인식하여 DNA를 절단하는 효소이다. 실험에서 사용된 HindⅢ와 Eco RⅠ은 각각 λ DNA를 다른 위치에서 절단한다. HindⅢ는 DNA를 5번 절단하여 6개의 segments를 생성하고, Eco RⅠ은 4번 절단하여 5개의 segments를 생성한다. 제한효소는 sticky end(상보적 단일가닥)를 만들어 유전자 클로닝에 활용된다. 2. 전기영동(Gel Electrophoresis) 전기영동은 절단된 DNA fragments를 크기별로 분리...2025.11.16
-
DNA 클로닝 및 PCR 실험을 통한 DNA 기술 이해2025.11.161. DNA 클로닝 및 형질전환 DNA 클로닝은 원하는 DNA를 조작하고 복제하여 많은 복제 DNA를 얻는 기술입니다. 형질전환은 외부 유전자를 세포 내로 넣어 숙주세포가 새로운 유전형질을 갖게 되는 과정입니다. E.coli의 형질전환은 화학적 형질전환과 전기천공법으로 나뉘며, 화학적 형질전환은 CaCl2를 처리하여 세포벽을 중성화하고 heat shock을 통해 DNA 이동을 촉진합니다. Plasmid는 origin, MCS, lacZ 유전자, ampicillin resistance gene으로 구성되어 있습니다. 2. PCR(중합...2025.11.16
-
PCR 프라이머 디자인 실습 가이드2025.11.111. PubMed 논문 검색 PubMed 데이터베이스에 접속하여 RAW 264.7 세포주 관련 프라이머 서열을 검색한다. 검색 시 RT-PCR을 제외하여 일반 PCR 프라이머를 찾는다. Real-time PCR의 경우 PCR 산물이 100~200bp로 작아 클로닝이 어렵기 때문이다. 대학교 이메일을 사용하면 유료 논문도 접근 가능하다. 2. Primer BLAST 분석 NCBI Primer BLAST 도구를 이용하여 PCR 산물의 크기를 예측한다. 논문에서 찾은 프라이머 서열을 입력하고, 생물종을 Homo sapiens에서 Mus ...2025.11.11
-
Ligation & Transformation 예비레포트2025.11.151. DNA Ligation (DNA 연결) 유전자 클로닝 과정에서 DNA ligase 효소를 이용하여 insert DNA와 vector DNA를 연결하는 실험. 제한효소로 처리된 DNA 말단을 DNA ligase 효소로 연결하여 재조합 DNA를 만드는 과정. 50ng의 vector DNA에 대해 1:1, 1:5, 1:10 등의 비율로 insert DNA를 혼합하고, 37℃에서 1시간 반응시켜 DNA 연결을 수행한다. 2. Bacterial Transformation (박테리아 형질전환) 재조합 DNA를 대장균(CP cell)에 도...2025.11.15
1 / 16
