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SDS-PAGE2025.01.121. SDS-PAGE SDS-PAGE는 단백질을 분리하는 기술로, 전기영동 이동성을 이용한다. 단백질은 SDS 처리를 통해 균일하게 음전하를 띠게 되어 분자량에 따라 분리될 수 있다. 이 실험에서는 단백질 발현에 IPTG의 영향을 확인하고자 하였으나 이전 실험 결과의 불확실성으로 인해 IPTG의 영향을 명확히 알기 어려웠다. 단백질 염색 결과를 통해 약 45 kDa 크기의 단백질이 분리된 것을 확인할 수 있었다. 2. Discontinuous Buffer System Discontinuous buffer system은 stackin...2025.01.12
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이화여대 생명과학실험 A+ 리포트(DEAE sepharose anion exchange chromatography)2025.01.231. Column chromatography 크로마토그래피는 주어진 시료 중 정량 분석하고자 하는 성분을 분리하고 확인하는 수단으로, 여러 다른 화합물들이 상이한 두 가지 phases 간에 분포되어 있거나 어느 물질 내의 분리 가능한 부위들 사이에 분포되어 있을 때 그 분포된 정도가 화합물들끼리 서로 다르다는 사실에 기초한 방법이다. 한 가지 상은 정지상(stationary phase)이고 다른 상은 이동상(mobile phase)이다. 이동상은 정지상을 일고 있는 물질 위로 흐르는데, 분리될 시료는 이 이동상을 따라 운반된다. 시...2025.01.23
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단백질 정제2025.01.231. 재조합 단백질 발현 재조합 단백질 기법은 정제하려고 하는 단백질의 유전자를 플라스미드 벡터에 삽입한 후, 이 플라스미드 벡터를 다시 세포에 도입하면 그 세포가 도입된 외부 유전자를 마치 원래 자기가 가지고 있던 유전자인 것처럼 발현을 하는 방법이다. 이번 단백질 정제실험에서 사용하는 플라스미드인 pET28a Vector는 kanamycin이라는 항생제에 대한 저항성을 부여하는 유전자인 KanR을 갖고 있어, 배양액에 kanamycin 항생제를 넣어놓고 그곳에 대장균을 넣으면 KanR을 갖고 있는 플라스미드인 pET28a Vec...2025.01.23
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SDS-PAGE를 이용한 AP 단백질 분석 및 Coomassie Blue Staining2025.01.171. SDS-PAGE를 이용한 단백질 분석 SDS-PAGE 실험을 통해 AP 단백질의 크기와 순도를 확인할 수 있었습니다. SDS-PAGE 과정에서 단백질의 3차 구조를 제거하고 크기에 따라 분리되도록 하여, 목표 단백질인 AP 단백질을 선별적으로 확인할 수 있었습니다. 또한 Coomassie Blue 염색을 통해 단백질 밴드를 시각화하여 분석할 수 있었습니다. 2. 단백질 정제 과정 단백질 정제 과정에서 target 단백질 이외의 비특이적으로 결합한 단백질들이 씻겨나가면서 target 단백질의 순도가 높아지는 것을 확인할 수 있었...2025.01.17
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[만점 레포트] 연세대학교 생화학실험(1) 4주차 gel filteration chromatography2025.05.041. Gel Filtration Chromatography Gel filtration chromatography is a technique used to separate molecules based on their size and shape. It involves passing a sample through a column packed with porous beads, where larger molecules elute first and smaller molecules elute later. The technique is usefu...2025.05.04
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생명과학실험1 단백질 정제 및 기능 분석을 위한 DEAE sepharose anion exchange chromatography2025.01.171. 단백질 정제 이 실험에서는 E.coli에서 추출한 alkaline phosphatase(AP) 단백질을 DEAE sepharose anion exchange chromatography를 이용하여 정제하는 과정을 다루고 있습니다. AP는 E.coli의 outer membrane과 inner membrane 사이에 존재하는 periplasmic space에 위치하며, osmotic shock을 통해 추출할 수 있습니다. 추출된 AP 단백질 혼합물은 열처리, 투석, ion exchange chromatography 등의 과정을 거쳐...2025.01.17
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단백질 분석(SDS-PAGE & Fluorescence)2025.05.141. SDS-PAGE SDS-PAGE는 Sodium dodecyl sulfate - polyacrylamide gel eletrophoresis의 약자로, 5~250 kDa 사이의 단백질을 분리할 때 사용되는 방법입니다. SDS는 단백질에 결합하여 전하의 영향을 배제하고 크기에 의해 이동속도가 결정되도록 합니다. 또한 DTT와 같은 reducing agent는 단백질의 disulfide bond를 변성시켜 linear한 1차 구조로 만듭니다. SDS-PAGE 후 단백질을 확인하기 위해 Coomassie Briliant Blue, s...2025.05.14
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효소학_경북대_족보_기말고사2025.05.031. 보조효소 보조효소에는 Ubiquinone, flavin, pyrimidine nucleotide, lipoic acid, glutathione, coenzyme A, porphyrin, SAM 등 10개가 있다. 이들 보조효소는 효소 단백질에 결합하여 효소의 활성이나 안정성에 필요한 구조를 유지하는 역할을 한다. 2. 금속이온의 역할 금속이온은 효소 단백질에 결합하여 활성이나 안정성에 필요한 구조를 유지하고, 기질과 결합하여 기질-금속 복합체를 형성하여 기질로 작용하게 하는 등 4가지 역할을 한다. 3. 분광학적 방법 분광학적...2025.05.03
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레닌저 생화학 정리노트 Ch03. 아미노산 펩타이드 단백질2025.05.101. 아미노산 아미노산은 아미노기와 카복실기를 포함하고 있으며 두 작용기는 a-carbon에 의하여 연결됩니다. a-carbon은 4개의 치환기(substitunents)를 가지기 때문에 사면체(tetrahedral)이며 손대칭 중심(chiral center)입니다. 아미노산은 R기의 특성에 따라 5가지 기본 그룹으로 나뉘어질 수 있습니다: 비극성 지방족, 방향족, 극성 비전하, 양전하, 음전하. 아미노산은 최소 2개의 이온화 가능한 양성자를 가지고 각각의 pKa 값을 가지며, 화학적 환경이 pKa에 영향을 줍니다. 아미노산은 낮은...2025.05.10
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크로마토그래피에 의한 단백질 정제 탐구2025.01.291. 단백질 정제 단백질 정제는 정제된 단백질을 분리하고 얻는 과정이다. 유전자 재조합 이후, 단백질 발현 과정을 거쳐 단백질 정제 단계에서 단백질을 정제할 수 있는 다양한 크로마토그래피 기법이 있다. 이러한 기술을 통해 특정 단백질을 정밀하게 분리할 수 있으며 바이오 의약품, 생명공학 및 기초 연구 분야에 적용하여 활용될 수 있다. 2. 크로마토그래피 기법 크로마토그래피는 단백질 정제에 사용되는 다목적 기술로, 전하 기반 분리를 위한 이온 교환, 특정 결합 상호작용을 활용한 친화성, 크기 기반 분리를 위한 크기 배제가 포함된다. ...2025.01.29
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