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Lowry-Folin 법을 이용한 단백질 정량2025.01.271. 단백질 정량 단백질 정량은 단백질의 발색반응과 흡광도 측정을 사용한다. 단백질은 농도에 비례하여 발색하기 때문에, 흡광도 측정으로 농도를 분석할 수 있다. Lowry-Folin 법은 Biuret 법에 추가 요소가 포함된 정량법으로, 강알칼리성 상태에서 2가 구리이온과 착염을 형성하여 발색하고 아미노산 중 트립토판, 타이로신, 시스테인이 Folin 시약을 환원시켜 청색으로 발색하는 반응을 이용한다. 2. BSA 표준용액 단백질 정량을 위해서는 정확한 농도를 알고 있는 BSA(bovine serum albumin) 표준용액을 사용...2025.01.27
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Bradford법을 이용한 조단백질 정량시험2025.01.121. 단백질 정량 분석법 Bradford법은 Coomassie Brillant Blue G-250(CBBG)이 단백질과 결합하여 파란색으로 변하는 것을 이용하여 단백질의 농도를 측정하는 방법이다. 이 방법은 신속하고 경제적이며 재현성이 높고 민감도가 매우 높다는 장점이 있지만, 비선형 표준곡선, 계면활성제의 영향, 단백질 종류에 따른 응답 차이 등의 단점도 있다. 2. 우유의 단백질 함량 실험 결과, 우유의 단백질 농도는 46.5 mg/mL로 측정되었다. 이는 국가표준식품성분표에 나와 있는 우유의 단백질 농도 31.79 mg/mL보...2025.01.12
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Lowry-Folin법을 이용한 단백질 정량 (생화학 실험)2025.01.161. 단백질 정량 실험 목적은 Lowry 방법으로 수용액에 녹아 있는 단백질의 양을 정량하는 것입니다. 이를 위해 표준 용액을 이용한 표준 곡선의 작성과 비색정량법을 습득합니다. Lowry 단백질 분석법은 강알칼리 조건에서 구리 이온과 펩타이드 결합의 반응, 그리고 Folin-Ciocalteu 시약과의 반응을 통해 단백질을 정량합니다. 이 방법은 트립토판, 시스테인, 티로신 등의 아미노산과 반응하여 발색되는 원리를 이용합니다. 2. 분광광도법 분광광도법은 물질에 의한 빛의 흡수 현상을 이용하여 화학물질의 양을 정량하는 방법입니다. ...2025.01.16
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생명과학 보고서_SDS-PAGE & Western blot(아주대 전공실험2)2025.05.161. SDS-PAGE SDS-PAGE는 단백질을 분자량에 따라 분리하는 기법으로, 단백질 시료에 SDS를 처리하여 단백질의 3차 구조를 풀어 선형화시킨 후 전기영동을 통해 분리한다. SDS는 단백질에 결합하여 음전하를 띠게 하므로, 단백질은 분자량에 비례하여 양극으로 이동하게 된다. 이를 통해 복잡한 단백질 혼합물을 효과적으로 분리할 수 있다. 2. Western blot Western blot은 특정 단백질의 유무 또는 양을 확인하는 분석 방법이다. 전기영동으로 분리된 단백질을 membrane에 전이시킨 후, 표적 단백질에 특이적...2025.05.16
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자외 및 가시분광광도계2025.01.111. 자외 및 가시분광광도계 자외 및 가시 분광광도계는 단백질을 정량할 수 있는 중요한 실험 기법이다. 단백질은 세포보다도 훨씬 작아 육안으로 관찰하기 어려우므로 분광광도법을 이용하여 단백질의 양을 정량할 수 있다. 분광광도법은 효소반응 연구와 약물 효과 평가에 활용될 수 있다. 실험에서는 주로 자외선과 가시광선 영역의 빛을 사용하며, 비어의 법칙에 따라 시료의 농도와 흡광도 간의 관계를 파악할 수 있다. BCA assay는 단백질이 구리 이온을 환원시키는 성질을 이용하여 단백질의 양을 정량하는 방법이다. 1. 자외 및 가시분광광도...2025.01.11
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재결합 단백질의 발현/ Expression of recombinant proteins in E. coli2025.01.121. GST-tagged Proteins glutathione S-transferase (GST), histidine (HIS), 기타 친화성 태그를 이용하여 단백질을 정제하게 되면 기존에 잘 알려진 생화학적 특성을 가진 단백질과 알려지지 않은 생화학적 특성을 가진 재조합 단백질의 N 말단에 결합하여 정제를 도와준다. GST 단백질은 번역 시에 안정적이고 가용성이 높은 단백질로 빠르게 접히기 때문에, GST 태그를 포함하면 태그가 없을 때보다 더 잘 발현하고 용해도를 촉진하는 경우가 많다. 2. BCA assay BCA는 Lowry...2025.01.12
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미지 시료의 단백질 정량 - Kjeldahl method 활용2025.05.101. 단백질 정량 본 실험에서는 Kjeldahl method를 사용하여 미지의 시료(Rat 사료, 2g)에 함유된 질소를 정량하고, 이를 단백질량으로 환산하여 시료 중의 단백질량을 알아내었다. 실험 결과 시료의 조단백질 함량은 18.82%로 나타났다. Kjeldahl 기구의 각 부위에서 일어나는 화학적 반응(분해, 증류, 중화, 적정)도 고찰하였다. 2. 단백질 정량법 단백질 정량법에는 세미마이크로킬달법, 홀몰적정법, 반스라이크법 등이 있으며, 본 실험에서는 semi-micro kjeldahl 법을 사용하였다. 이 방법은 시료 내 ...2025.05.10
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Cell harvest and protein assay2025.01.231. Cell harvest 세포 배양 시 adherent cell과 suspension cell로 구분할 수 있으며, adherent cell을 harvest하는 방법에는 화학적 방법(trypsin, accutase 사용)과 물리적 방법(scraper 사용)이 있다. 이번 실험에서는 물리적 방법인 scraper를 사용하여 adherent cell을 harvest하였다. 2. Protein extraction 세포 내 단백질을 추출하기 위해 lysis buffer와 phosphatase/protease inhibitor를 사용하여 ...2025.01.23
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세포 용해를 통한 단백질 추출2025.01.021. 세포 용해 방법 세포 용해(또는 세포 파괴)에 사용되는 다양한 물리적, 화학적 방법을 살펴보고, RIPA 용해 완충액을 사용하여 세포를 파괴하고 세포 단백질을 얻을 수 있다. RIPA 용해 완충액은 세포막, 핵막, 단백질 결합을 모두 분해할 수 있는 강한 계면활성제를 포함하고 있어 세포질, 핵 단백질 등 다양한 단백질을 추출할 수 있다. 2. 단백질 추출 과정 배양 중인 MCF-7 세포를 DPBS로 세척하고 세포 긁개로 세포를 모아 원심분리하여 세포 펠릿을 얻었다. 이 세포 펠릿에 RIPA 용해 완충액을 처리하여 세포를 용해하...2025.01.02
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[만점 레포트] 연세대학교 생화학실험(1) 5주차 method for protein concentration determination2025.05.041. Protein Concentration Determination 이 프레젠테이션에서는 단백질 농도 측정을 위한 다양한 방법들을 소개하고 있습니다. 저브리 방법, 브래드포드 방법, BCA 방법 등 여러 가지 방법론이 설명되어 있으며, 각 방법의 원리와 장단점, 적용 범위 등이 자세히 다루어지고 있습니다. 또한 실험 절차와 계산 방법도 구체적으로 제시되어 있어 실제 실험에 활용할 수 있는 정보를 제공하고 있습니다. 2. Spectrophotometry 단백질 농도 측정을 위해 다양한 분광광도법이 소개되고 있습니다. UV 분광광도법...2025.05.04
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