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자외 및 가시분광광도계2025.01.111. 자외 및 가시분광광도계 자외 및 가시 분광광도계는 단백질을 정량할 수 있는 중요한 실험 기법이다. 단백질은 세포보다도 훨씬 작아 육안으로 관찰하기 어려우므로 분광광도법을 이용하여 단백질의 양을 정량할 수 있다. 분광광도법은 효소반응 연구와 약물 효과 평가에 활용될 수 있다. 실험에서는 주로 자외선과 가시광선 영역의 빛을 사용하며, 비어의 법칙에 따라 시료의 농도와 흡광도 간의 관계를 파악할 수 있다. BCA assay는 단백질이 구리 이온을 환원시키는 성질을 이용하여 단백질의 양을 정량하는 방법이다. 1. 자외 및 가시분광광도...2025.01.11
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생명과학 보고서_SDS-PAGE & Western blot(아주대 전공실험2)2025.05.161. SDS-PAGE SDS-PAGE는 단백질을 분자량에 따라 분리하는 기법으로, 단백질 시료에 SDS를 처리하여 단백질의 3차 구조를 풀어 선형화시킨 후 전기영동을 통해 분리한다. SDS는 단백질에 결합하여 음전하를 띠게 하므로, 단백질은 분자량에 비례하여 양극으로 이동하게 된다. 이를 통해 복잡한 단백질 혼합물을 효과적으로 분리할 수 있다. 2. Western blot Western blot은 특정 단백질의 유무 또는 양을 확인하는 분석 방법이다. 전기영동으로 분리된 단백질을 membrane에 전이시킨 후, 표적 단백질에 특이적...2025.05.16
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단백질 정량2025.05.071. Biuret method 단백질의 알칼리성 수용액에 저농도 황산구리용액을 몇 방울 떨어뜨리면 청자~적자 색을 띠는 단백질 발색반응이 일어난다. 발색은 구리(II)이온과 착체가 형성되어 이루어진다. 트리펩티드 이상의 펩티드도 같은 반응을 보이고, 발색률은 펩티드에 따른 차이가 거의 없다. 조작이 간단하고 다수의 시료를 단시간에서 측정할 수 있어 많이 사용하지만, 감도가 낮다. 2. Ultraviolet Absorption Method 단백질의 tryptophan과 tyrosin잔기가 280 nm에서 강하게 흡광하는 성질을 이용하...2025.05.07
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Cell harvest and protein assay2025.01.231. Cell harvest 세포 배양 시 adherent cell과 suspension cell로 구분할 수 있으며, adherent cell을 harvest하는 방법에는 화학적 방법(trypsin, accutase 사용)과 물리적 방법(scraper 사용)이 있다. 이번 실험에서는 물리적 방법인 scraper를 사용하여 adherent cell을 harvest하였다. 2. Protein extraction 세포 내 단백질을 추출하기 위해 lysis buffer와 phosphatase/protease inhibitor를 사용하여 ...2025.01.23
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BCA assay 정량2025.01.241. BCA assay BCA assay는 단백질 정량 방법 중 하나로, 구리 이온이 단백질과 반응하여 발색하는 원리를 이용합니다. A 용액과 B 용액을 50:1 비율로 섞어 사용하며, 표준 단백질 농도를 0, 0.125, 0.25, 0.5, 1, 2 ug/ml로 준비하여 흡광도를 측정합니다. 이를 통해 샘플의 단백질 농도를 계산할 수 있습니다. 샘플 버퍼, 단백질 양, 용해 버퍼의 양 등을 고려하여 western blotting 실험에 사용할 수 있습니다. 1. BCA assay The BCA (Bicinchoninic Acid)...2025.01.24
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식품의 조단백 정량분석(Micro-Kjeldahl 법[붕산법])2025.01.241. 식품 조단백 정량분석 식품의 단백질 함량을 측정하는 것은 식품의 품질을 결정하는 중요한 요인이다. 이 실험에서는 Micro-Kjeldahl 법(붕산법)을 사용하여 쌀귀리의 조단백 함량을 측정하였다. 실험 과정에는 분해, 증류, 중화, 적정의 4단계가 포함되며, 분해 과정에서 발생하는 유해 가스는 Scrubber를 통해 중화시켰다. 실험 결과, 쌀귀리의 조단백 함량은 11.86±0.04%로 나타났으며, 신뢰수준은 99.62%로 높은 신뢰도를 보였다. 1. 식품 조단백 정량분석 식품 조단백 정량분석은 식품 성분 분석에 있어 매우 ...2025.01.24
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Bradford법을 이용한 조단백질 정량시험2025.01.121. 단백질 정량 분석법 Bradford법은 Coomassie Brillant Blue G-250(CBBG)이 단백질과 결합하여 파란색으로 변하는 것을 이용하여 단백질의 농도를 측정하는 방법이다. 이 방법은 신속하고 경제적이며 재현성이 높고 민감도가 매우 높다는 장점이 있지만, 비선형 표준곡선, 계면활성제의 영향, 단백질 종류에 따른 응답 차이 등의 단점도 있다. 2. 우유의 단백질 함량 실험 결과, 우유의 단백질 농도는 46.5 mg/mL로 측정되었다. 이는 국가표준식품성분표에 나와 있는 우유의 단백질 농도 31.79 mg/mL보...2025.01.12
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미지 시료의 단백질 정량 - Kjeldahl method 활용2025.05.101. 단백질 정량 본 실험에서는 Kjeldahl method를 사용하여 미지의 시료(Rat 사료, 2g)에 함유된 질소를 정량하고, 이를 단백질량으로 환산하여 시료 중의 단백질량을 알아내었다. 실험 결과 시료의 조단백질 함량은 18.82%로 나타났다. Kjeldahl 기구의 각 부위에서 일어나는 화학적 반응(분해, 증류, 중화, 적정)도 고찰하였다. 2. 단백질 정량법 단백질 정량법에는 세미마이크로킬달법, 홀몰적정법, 반스라이크법 등이 있으며, 본 실험에서는 semi-micro kjeldahl 법을 사용하였다. 이 방법은 시료 내 ...2025.05.10
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[만점 레포트] 연세대학교 생화학실험(1) 5주차 method for protein concentration determination2025.05.041. Protein Concentration Determination 이 프레젠테이션에서는 단백질 농도 측정을 위한 다양한 방법들을 소개하고 있습니다. 저브리 방법, 브래드포드 방법, BCA 방법 등 여러 가지 방법론이 설명되어 있으며, 각 방법의 원리와 장단점, 적용 범위 등이 자세히 다루어지고 있습니다. 또한 실험 절차와 계산 방법도 구체적으로 제시되어 있어 실제 실험에 활용할 수 있는 정보를 제공하고 있습니다. 2. Spectrophotometry 단백질 농도 측정을 위해 다양한 분광광도법이 소개되고 있습니다. UV 분광광도법...2025.05.04
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세포 용해를 통한 단백질 추출2025.01.021. 세포 용해 방법 세포 용해(또는 세포 파괴)에 사용되는 다양한 물리적, 화학적 방법을 살펴보고, RIPA 용해 완충액을 사용하여 세포를 파괴하고 세포 단백질을 얻을 수 있다. RIPA 용해 완충액은 세포막, 핵막, 단백질 결합을 모두 분해할 수 있는 강한 계면활성제를 포함하고 있어 세포질, 핵 단백질 등 다양한 단백질을 추출할 수 있다. 2. 단백질 추출 과정 배양 중인 MCF-7 세포를 DPBS로 세척하고 세포 긁개로 세포를 모아 원심분리하여 세포 펠릿을 얻었다. 이 세포 펠릿에 RIPA 용해 완충액을 처리하여 세포를 용해하...2025.01.02
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