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1. 미생물 배양을 통한 실험보고서
1.1. 실험목적 및 배경
미생물 배양을 통한 실험의 목적은 미생물 배양을 위해 고체평판배지(NA배지)를 제조하고, streak plate법을 이용하여 미생물을 분리배양하는 것이다.
미생물을 성장, 증식시키기 위해서는 탄소원, 질소원, 무기이온, 아미노산, 비타민과 발육촉진인자 등의 영양성분이 필요하다. 세균류는 다양한 영양요구성을 나타내는데, 무기물로만 구성된 배지에서도 자랄 수 있고 아미노산, 비타민과 복잡한 유기화합물이 첨가된 배지에서도 자랄 수 있다. 이러한 영양요구성은 세균의 종류에 따라 각기 다르다.
배지(medium)는 미생물의 배양에 필요한 각종 영양분을 혼합하여 제조한 것으로, 화학조성에 따라 합성배지와 복합배지로 구분되고, 기능에 따라 선택배지, 분별배지, 영양배지로 나뉜다. 물리적 성질에 따라서는 액체배지, 고체배지, 반고체배지로 구별된다. 미생물을 증식시키는 과정을 배양(culture)이라고 하며, 혼합배양과 순수배양이 있다. 이때 접종과정에서 외부 균에 의한 오염이 발생할 수 있으므로 무균조작이 필수적이다.
1.2. 미생물 배양을 위한 배지 제조
미생물 배양을 위한 배지 제조는 미생물을 성장, 증식시키는 데 필수적인 작업이다. 배지는 탄소원, 질소원, 무기이온, 아미노산, 비타민과 발육촉진인자 등의 영양성분이 포함된 용액으로, 세균의 종류에 따라 각기 다른 영양요구성을 가지고 있다.
배지의 종류는 화학 조성에 따라 합성배지와 복합배지로 나뉜다. 합성배지는 미생물의 영양요구성을 알고 있을 때 C, N, S, P, 무기질을 포함한 간단한 조성으로 만들며, 복합배지는 특정 미생물의 영양요구성을 모를 때 화학 조성을 모르는 성분을 포함하여 제조한다. 기능에 따라서는 선택배지, 분별배지, 풍부배지 등으로 분류된다. 물리적 성질에 따라서는 액체배지, 고체배지, 반고체배지로 나뉜다.
본 실험에서는 고체평판배지인 nutrient agar(NA)배지를 제조하였다. 우선 멸균된 삼각플라스크에 증류수 100ml를 넣고 nutrient agar 2.3g을 혼합한 후 가열하면서 잘 섞어주었다. 용액이 투명해지면 멸균 확인 테이프를 부착하고 고압멸균기에서 121°C, 30분간 멸균하였다. 멸균이 끝나면 65°C 수욕조에 넣어 천천히 식힌 후 약 60°C 정도가 되면 페트리접시에 20~25ml씩 부어 상온에서 굳혔다. 이렇게 제조된 NA배지는 미생물의 순수배양을 위해 사용되었다.
배지 제조 과정에서 균오염을 방지하기 위해 플라스크 입구를 은박지로 봉하고, 배지를 옮겨 붓는 과정에서 시험관 입구를 화염 멸균하는 등 무균조작이 매우 중요했다. 이처럼 미생물 배양을 위한 배지 제조는 세균의 영양 요구성을 고려하여 적절한 조성의 배지를 만들고, 오염을 막기 위한 멸균과 무균 조작이 필수적이다.
1.3. 미생물 분리 및 배양 과정
미생물 분리 및 배양 과정은 다음과 같다.
백금이/백금선을 화염 멸균한다. 백금이가 식도록 10~20초 기다리거나 배지에 눌러 식힌다. 세균을 취하여 평판배지에 도말한다. 4-Phase 패턴으로 도말하며 각 단계마다 ...
