소개글
"단백질정량 bradford"에 대한 내용입니다.
목차
1. 단백질 정량
1.1. Bradford법을 이용한 단백질 정량
1.1.1. 실험 목적
1.1.2. 실험 이론
1.1.3. 실험 도구 및 재료
1.1.4. 실험 방법
1.1.5. 실험결과
1.1.6. 실험 고찰
1.2. Bradford Assay를 통한 미지시료 농도 측정
1.2.1. 서론
1.2.2. 재료 및 실험방법
1.2.3. 실험 결과
1.2.4. 토의
1.3. Bradford Method와 Bicinchoninic Acid Method를 이용한 단백질 정량
1.3.1. 실험 날짜
1.3.2. 실험 목적
1.3.3. 실험 기구 및 시약
1.3.4. 실험 방법
1.3.5. 실험 결과
1.3.6. 고찰
2. 참고 문헌
본문내용
1. 단백질 정량
1.1. Bradford법을 이용한 단백질 정량
1.1.1. 실험 목적
Coomassie blue 시약과 단백질이 반응하여 색이 변화하는 정도를 흡광도 측정하여 단백질을 정량할 수 있다.
1.1.2. 실험 이론
Bradford법은 Coomassie blue 시약과 단백질이 반응하면 적색의 시약이 청색으로 변하는 것을 이용한 단백질 정량법이다. 단백질이 Coomassie blue 시약과 반응하면 적색의 시약이 청색으로 변하는데, 이때 생성된 청색 복합체의 흡광도를 595nm에서 측정하여 단백질 농도를 정량한다.
단백질과 Coomassie blue 시약 사이의 결합은 소수성 상호작용과 정전기적 상호작용에 의해 이루어진다. 단백질 분자의 양전하를 띤 잔기들이 Coomassie blue의 sulfonicacid group과 결합하고, 단백질의 소수성 아미노산 잔기들이 Coomassie blue의 방향족 고리와 소수성 결합을 형성한다. 이러한 상호작용에 의해 단백질 농도가 높아질수록 더 많은 Coomassie blue 시약이 결합하여 청색의 발색 정도가 증가하게 된다.
Bradford법은 단백질 정량 방법 중 하나로, 신속하고 재현성이 크며 감도가 Lowry법보다 수배 민감하다. 또한 양이온이나 polyphenol, sucrose와 같은 물질의 간섭이 없어 편리한 방법이다. 하지만 단백질마다 Coomassie blue와의 결합력이 달라 표준 단백질 설정이 필요하다는 단점이 있다.
1.1.3. 실험 도구 및 재료
Coomassie blue 시약, 단백질액, Vortex mixer, 큐벳, 마이크로 피펫, 팁, 비이커, 시험관, spectrophotometer가 실험 도구 및 재료이다.
1.1.4. 실험 방법
마이크로 피펫을 이용하여 용액이 든 시험관 안에 블랭크와 단백질 용액을 넣어준다. Vortex mixer로 용액을 잘 섞어준다. 균질하게 잘 섞인 용액을 마이크로 피펫으로 큐벳에 1ml 분주해준다. 각각 농도가 상이한 용액의 큐벳을 흡광 측정한다."
1.1.5. 실험결과
Calibration curve를 통해 미지의 농도를 가진 단백질 액의 흡광도를 측정할 수 있다. y=0.0124x의 식의 y값에 흡광도를 대입하면 단백질 농도인 x값을 유추할 수 있다. 과제에서 y(Abs값)이 0.508일 때 x=y/0.0124 ∴0.508/0.0124=40.97μg/ml 이므로, 흡광도가 0.508을 띌 때 단백질이 40.97μg/ml만큼 있음을 알 수 있다.
1.1.6. 실험 고찰
이번 실험을 통해 단백질 정량을 마무리 짓게 되었다. 위 실험에서 주의해야 할 점이 두 가지 있었는데, 첫 번째는 마이크로 피펫 작동법이었다. pipetting을 할 때 용액에 기포가 생기지 않도록 주의해야...
참고 자료
식품분석 강의노트/ 부천대학교 식품영양학과
식품영양실험핸드북 / 한국식품영양과학회 편찬/ 도서출판 효일
단백질과 색소 Coomassie blue G250과의 결합능력/ 박노동 / 전남대학교 농과대학 농화학과
대한화학회, 『표준일반화학실험』, 대한화학회:서울, 91-95 (2011).
Jace Everette D. et al., Thorough Study of Reactivity of Various Compound Classes toward the Folin−Ciocalteu Reagent, J. Agric. Food Chem. 58, 14 (2010).
Olsen B. J. and Markwell J. "Assays for the Determination of Protein Concentration". Current Protocols in Protein Science, 14–17 (2007).
김미리,최보희,김현정,조은비,최현아,홍정일. 단백질 정량 발색반응에 미치는 Zinc Protoporphyrin의 영향. 자연과학연구논문집 VOL.24 NO.- (2012) pp. 58~59.
1
2
3
4
5
6
7
8