소개글
"제한 효소와 소화 실험 보고서"에 대한 내용입니다.
목차
1. 유전자 클로닝을 위한 제한효소 실험
1.1. 제한효소 EcoRI의 특성
1.2. 재조합 플라스미드 제작을 위한 제한효소 활용
1.3. Agarose gel electrophoresis를 통한 DNA 분리
1.4. 실험 결과 및 고찰
2. 온도와 pH가 효소 활성에 미치는 영향
2.1. 효소의 종류와 역할
2.2. 효소의 기질 특이성
2.3. 온도와 pH가 제한효소 활성에 미치는 영향
2.4. 실험 결과 분석 및 고찰
3. 참고 문헌
본문내용
1. 유전자 클로닝을 위한 제한효소 실험
1.1. 제한효소 EcoRI의 특성
EcoRI는 대장균의 플라스미드 RY13에서 코드되며 DNA의 특수한 6염기배열 5′-GAATTC-3′을 인식하여 다음과 같이 절단한다. 즉, 5′-인산과 3′-OH말단이 생성된다. EcoRI는 50mM NaCl, 100mM tris-HCl 완충액(pH 7.5), 5mM MgCl2액에서 최적반응조건을 나타낸다. 그러나 고농도의 글리세롤이나 저농도의 염분 조건에서는 스타 활성(AATT만 인식)이 나타나기 쉽다. EcoRI는 가격이 저렴하여 유전자지도만들기(gene mapping)나 재조합 DNA 조작 등에 널리 사용된다.
1.2. 재조합 플라스미드 제작을 위한 제한효소 활용
재조합 플라스미드 제작을 위한 제한효소 활용이란 수백 종류의 제한효소들이 밝혀져왔으며, 각각의 제한효소는 제한효소자리(restriction site; 일반적으로 4~8개 염기서열)라는 염기서열을 인지하고 DNA 두 가닥을 자르는 것을 말한다. 재조합 DNA 제작 과정에서 제한효소는 다음과 같이 사용된다. 대장균으로부터 분리한 특정 제한효소에 의해 인식되는 단일 제한효소자리 염기서열을 가지고 있는 세균 플라스미드가 상단부에 있다. 대부분의 제한 부위는 대칭적인데, 염기서열을 5´→3´ 방향으로 읽을 때 양쪽 가닥이 동일하다. 이러한 짧은 서열은 보통(우연적으로) 긴 DNA 분자 내에서 여러 번 나타나므로 제한효소는 다양한 크기의 분자, 즉 제한효소절편(restriction fragment)을 만들 수 있다. 특정 DNA 분자들의 모든 사본들은 같은 제한효소에 노출되었을 때 항상 동일한 제한효소절편들을 생성한다. 이처럼 한 종류의 제한효소는 언제나 같은 방식으로 DNA를 자른다. 특히 제한효소 중 엇갈린 방법(stagged way)으로 DNA 두 가닥의 인산화 당 구조를 절단하는 것이 가장 유용한데, 그 결과 양 가닥 제한효소절편들은 점착말단(sticky end)이라고 불리는 단일가닥 말단을 가지게 된다. 이러한 짧은 단일 가닥 말단 부위는 동일한 효소로 절단된 DNA의 상보적인 점착 말단과 수소결합 염기쌍을 형성할 수 있다. 이렇게 형성된 결합은 일시적이고, DNA 연결효소(DNA ligase)라는 효소에 의해서 영구적 결합이 된다. 이 효소는 인접한 인산화 당 구조 간에 공유결합을 형성하는 효소작용을 한다. 결과적으로 제한효소는 재조합 플라스미드에서처럼 DNA 연결효소를 통해 두 개 DNA의 결합을 촉진시켜 재조합 DNA를 생성하는데 필수적이다.
1.3. Agarose gel electrophoresis를 통한 DNA 분리
젤 전기영동(agarose gel electrophoresis)은 DNA 단편을 크기별로 분리하는 실험 방법이다. 아가로오스 젤은 해초로부터 추출된 물질로 선형 중합체의 형태를 하고 있으며, 적당한 완충용액(buffer...
참고 자료
식품과학기술대사전, 한국식품과학회, 광일문화사, 2008. 4.10
네이버 두산백과
생명과학대사전, 강영희, 도서출판 여초, 2008.
구글 위키백과
인터넷 홈페이지, NANOHELIX, http://www.nanohelix.co.kr/shop/main/index.php
산업응용미생물학, Michael J. Waites 외 3명, 라이프사이언스, 2006, 7, 5.
벨 생명과학 10판/Campbell 외 6명/(주)바이오사이언스출판/2016/p.107~109,409~412
Zum학습백과[효소의 구성과 종류](http://study.zum.com/book/13347)
화학공학소재연구정보센터(CHERIC)[전기영동](https://www.cheric.org/files/education/cyberlecture/e200112/e200112-1001.pdf)
다카라코리아바이오메디컬[제한효소의사용에관하여](https://www.takara.co.kr/web01/product/productList.asp?lcode=D043401)
