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1. 서론
면역조직화학과 효소조직화학은 조직병리 분야에서 매우 중요한 진단적 기술이다. 면역조직화학은 항원-항체 반응을 이용하여 조직 내 특정 물질을 검출하고 위치를 확인하는 방법이다. 이를 통해 종양의 세포형 규명, 염증 부위의 세포형 확인, 종양 예후 지표 평가, 감염 병원균 동정 등 다양한 진단에 활용될 수 있다. 효소조직화학은 조직 내 존재하는 효소의 활성을 화학적 반응을 통해 가시화함으로써 근섬유 분류, 근질환 진단 등에 활용된다. 이러한 면역조직화학과 효소조직화학은 조직 병리 분야에서 중요한 역할을 담당하고 있다. []
2. 조직검사학
2.1. 면역조직화학
2.1.1. 면역조직화학의 활용 범위
종양 병리에서 세포형의 규명, 염증세포침윤 부위에서 세포형의 규명, 종양의 예후 지표 평가, 감염 병원균의 동정, 결함 단백질의 동정과 세포 수준에서의 결함 유전자 전사 및 번역의 증거 제공, 자가면역질환에서의 면역복합체 침착의 평가, 잠재적 표적치료 전략을 위한 지표 제공, 세포 활성화와 세포자명사 경로 평가 등이 면역조직화학의 활용 범위이다. 면역조직화학은 항체가 특정 항원물질에 결합하는 성질을 이용하여 그 결합부위로부터 항원의 존재 부위를 검출한다. 항원-항체반응물은 그대로는 현미경하에서 관찰할 수 없으므로 항체를 육안으로 볼 수 있도록 표지자를 발색시켜 간접적으로 특정 물질(항원)을 검출한다. 항원-항체반응에서는 항원에 대한 항체의 결합이 매우 특이적이어서 항체는 대응하는 항원물질 이외에는 결합하지 않으며, 검출 민감도에 있어서도 일반 염색법에 비해 매우 우수하다. 이처럼 면역조직화학은 다양한 분야에서 활용되는 강력한 진단 기술이라고 할 수 있다.
2.1.2. 면역조직화학반응의 기본 원리
면역조직화학반응의 기본 원리는 다음과 같다. 면역조직화학은 항체가 특정 항원물질에 결합하는 성질(항원-항체 반응)을 이용한다. 즉, 항원-항체반응물은 그대로는 현미경하에서 관찰할 수 없지만, 항체를 육안으로 볼 수 있도록 표지자를 발색시켜서 간접적으로 특정 물질(항원)을 검출한다. 항원-항체반응에서는 항원에 대한 항체의 결합이 매우 특이적이어서 항체는 대응하는 항원물질 이외에는 결합하지 않는다. 또한 면역조직화학은 일반 염색법에 비해 검출 민감도가 매우 우수하다. 이러한 특성으로 인해 면역조직화학은 조직병리 진단분야에서 널리 활용된다.
2.1.3. 면역조직화학반응의 분류
면역조직화학반응은 크게 항체표지의 시점에 따라 표지항체법과 미표지항체법으로 분류된다. 표지항체법은 항체의 표지를 항원과의 반응에 앞서 수행하는 방식이며, 직접법과 간접법으로 나뉜다. 직접법은 검출항원에 대한 항체(일차항체)를 표지하여 반응시키는 방법이고, 간접법은 일차항체를 미표지 상태로 검출항원과 반응시킨 후 이 항체를 항원으로 하여 만든 이차항체를 표지하여 간접적으로 반응시키는 방법이다. 미표지항체법은 항체의 표지를 항원과의 반응 이후에 수행하는 방식으로, PAP법과 아비딘-비오틴법이 대표적이다. PAP법은 과산화효소에 대한 항체를 이용하여 면역복합체를 만드는 방법이며, 아비딘-비오틴법은 아비딘과 비오틴의 강한 친화성을 이용하여 표지자를 간접적으로 결합시키는 방식이다. 이와 같이 면역조직화학반응의 분류는 항체 처리 순서와 표지 방식에 따라 다양하게 이루어진다. 각각의 방법은 민감도와 특이도, 사용 편의성 등에서 차이를 보이므로 연구 목적과 조직 특성에 따라 적절한 기법을 선택하여 적용해야 한다.
2.1.4. 면역학의 기본 개념
면역체계는 외부 유해물질로부터 인체를 보호하는 중요한 기능을 수행한다. 이러한 면역반응은 항원-항체 반응을 기반으로 한다. 항원은 면역체계에 의해 인식되는 물질이며, 항체는 항원에 특이적으로 결합하여 그 항원을 제거하는 역할을 한다.
항체의 역가는 단클론항혈청의 경우 1:100에서 1:2000까지 다양하며, 단클론항체의 경우 1:10에서 1:1000까지 다양하다. 일반적으로 항체 역가가 높을수록 최적의 결과를 얻는데 필요한 반응시간이 짧다. 따라서 최적 항체 희석비율을 결정하기 전에 먼저 적절한 반응시간을 정하는 것이 더 우선적인 조건이다.
항체 반응 시 온도와 시간은 중요한 요인이다. 파라핀 절편의 경우 실온에서 반응하며, 동결절편은 4°C에서 overnight 처리한다. 일반적인 반응시간은 실온에서 15~30분 정도이다.
항체의 보존과 관리는 면역조직화학 실험에 있어 중요하다. 항체 활성에 영향을 미치는 인자에는 항체 단백질...
