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[환경]주입평판법 평가A+최고예요

1. 이론적 배경각종의 미생물은 각자의 가장 적합한 주위환경조건(pH, 온도, 산소 등)에서 생육한다. 즉 자연계에서는 동일 종류의 미생물만이 생육하는 경우는 극히 드물고 대부분의 경우 각종 미생물들이 혼재하여 생육하고 있다. 그러나 미생물 연구에 있어서는 어떤 특정의 활성을 나타내는 미생물이 어느 것인지 알아내야 하기 때문에 혼합 배양은 그다지 유용하지 못하다. 실험자가 목적으로 하는 미생물을 분리하여 그의 생육, 특성, 병원성, 대사과정 및 항생물질에 대한 감수성 등과 같은 생리학적 성질과 그 밖의 여러 가지 형태학적 성질을 연구하여 고유의 특성을 명백히 하는데는 먼저 개개의 미생물을 단독으로 분리하여 한 종류의 미생물만 배양하는 순수배양(pure culture)을 하는 것이 중요하다. 세균은 너무 작아 매우 정교한 미세 조작 기구가 없으면 직접 분리할 수 없기 때문에 간접적인 분리 방법을 사용한다.1870년대 Lister는 최종적으로 희석된 시험관에는 하나의 세균만이 존재할 것이라는 생각으로 연속 희석법(serial dilution)을 사용하여 순수배양을 시도하였다. 그러나 오염이 되는 등 극히 제한된 균만을 분리하였다. 1880년 Koch는 고체 배지를 사용하였고 그 후 희석에 의해 고체배지 상에서 세균을 분리할 수 있게 되었다.분리된 세균은 고체배지 상에서 생육하여 눈으로도 볼 수 있는 균락(colony)을 형성한다.현재는 세균을 분리하기 위한 3가지 희석법이 있는데 획선 평판법(streak plate), 평판 도말법(spread plate) 및 주입 평판법(pour plate)이다.획선 평판법(streak plate method)에서는 백금이를 사용하여 혼합 시료를 페트리접시 중의 고체 배지 표면에 종횡으로 여러 번 긋는다. 이론적으로는 이같이 백금이를 고체 배지 표면에 반복하여 긋는 동안 백금이로부터 세균이 차례로 떨어져 나오고 각각의 세포는 생육하여 균락을 형성하게 된다. 획선 평판법은 오늘날 가장 보편적인 분리법이다.평판 도말법(spread plate method)에서는 희석된 시료를 소량 취해서 고체 배지의 표면에 넣고 굽은 유리봉(콘라디봉)을 사용하여 도말시킨다.주입 평판법(pour plate method)에서는 시료를 여러 번 희석하여 각각의 희석액을 소량 취해서 용해된 각각의 고체 배지와 혼합하여 페트리 접시에 붓는다. 이 때 몇몇 페트리 접시에서는 분리된 균락이 형성될 것이다.2. 미생물의 순수분리 및 배양일반적으로 대다수의 세균이나 곰팡이는 고체배지에서 잘 자랄 수 있으므로 이들을 분리하는 데는 평판법이 적당하다. 그러나 아직도 보다 큰 몇 가지 세균들은 고체배지에서 성공적으로 배양하지 못하였으며, 많은 원생동물과 조류는 액체배지에서만 배양이 가능하다.비록 최근에 이르러서 비루스의 분리를 위한 평판법이 많이 밝혀지고 있지만 이들의 대부분은 액체배지를 이용하여 쉽게 분리할 수 있다. 물론 비루스는 절대세포내 기생체이므로 결코 순수배양을 얻을 수 없으며, 특정 비루스와 숙주생물로 구성된 이원배양이 이러한 미생물을 분리하는 데 사용된다.액체배지에서 가장 간단한 분리법은 희석법이다. 접종원은 멸균한 배지로 연속적으로 희석되며, 배지를 함유한 많은 수의 시험관에는 동량의 연속된 희석액을 접종한다. 이렇게 하는 이유는 일련의 시험관에 미생물 현탁액을 희석하여 접종함으로써 하나의 세포라도 그것이 시험관에 들어갈 확률을 작게 하기 위해서이다.그러나 희석법은 단점이 있다. 혼합된 미생물 개체군에서 수적으로 우세한 균주를 분리하는 데에만 이용할 수 있다는 것이다. 고체배지에서 자랄 수 없는 큰 미생물들을 분리하는 데에는 이용할 수 없는데, 그 이유는 자연계에서 일반적으로 이러한 미생물들은 세균보다 수적으로 미약하기 때문이다. 따라서 희석법의 이용은 한정되어 있다.3. 희석법(dilution methid)액체배지에서 가장 간단한 분리법이다. 접종원은 멸균한 배지로 연속적으로 희석되며, 배 지를 한유한 많은 수의 심험관에는 동량의 현속된 희석액을 접종한다. 이렇게 하는 이유는 이련의 시험관에 미생물현닥액을 희석시켜 접종함으로써 하나의 세포하도 그것이 시험관에 들어갈 확률을 작게 하기 위해서이다.그러나, 희석법은 단점이 하나 있다. 혼합된 미생물개체군에서 수적으로 우세한 균주를 분리하는 데에만 이용할 수 있다는 것이다. 고체배지에서 자랄 수 없는 큰 미생물들을 분리하는 데에는 이용할 수 없는데, 그 이유는 자연계에서 일반적으로 이러한 미생물은 세균보다. 수적으로 미약하기 때문이다. 따라서 희석법의 이용은 한정되어 있다.4. 희석법의 종류1) 주입평판법(pour plare method)주입 평판법(pour plating)과 Surface plating를 평판계수법이라 한다. 표면평판법은 뜨거운 한천배지에 의해 손상 받을 수 있는 열 감수성 미생물의 측정에 적합하며, 절대호기성균( obligate aerobes)은 한천배지 표면에서 빨리 자라서 큰 집락을 생성한다. 이 방법에서 중요한 것은 시료를 적절히 희석하여 형성되는 집락수가 적당해야 한다는 점이다. 실제로 통계적으로 가장 유효한 집락의 수는 평판당 25∼250개 사이이다. 생균수 측정으로 얻어지는 집락의 수는 접종량(inoculum size)뿐만 아니라, 사용되는 배지의 적합성과 배양조건 등이 영향을 미친다. 또한 2개 이상의 균이 뭉쳐서 하나의 집락을 형성한다면 실제 균수보다 적게 측정된다. 이러한 이유로 생균수의 측정은 생균수(viable cell count)라기보다는 집락형성 단위(colony-forming unit, cfu/㎖ 혹은 cfu/g)로서 표현된다. 이 방법은 여러 가지 어려운 점도 있지만, 생균수의 측정방법으로 가장 좋은 방법이며 폭넓게 사용되고 있다. 이 방법은 균수가 적은 시료에서도 측정이 가능하여 원료나 제품의 미생물학적 오염을 감지할 수 있다.더욱이 혼합 균주배양액 또는 오염된 시료로부터 특정한 균의 수를 선별배지(selective media)를 사용하여 측정할 수도 있다.2) 도말평판법(Streak plate culture)선상도말평판법은 혼재된 균을 한천평판배지의 표면에 획선도말하여 균을 순수 분리하는 방법중의 하나로 널리 이용되고 있다.1 배양균을 백금이로 한 백금이를 떠낸다2 Nutirient agar plate 를 뚜껑이 아래로 오도록 뒤집은 후 배지가 있는 평판의 바닥부분을 왼손으로 비스듬이 기울여 백금이로 식균한다.3 다시 뚜껑위에 놓고 백금이를 화염멸균한다.4 백금이를 접종하지 않은 배지의 가장자리에 찍어서 식힌다.5 평판배지에 선상도말하여 균을 희석 식균한다.6 선상도말한 Nutirient agar plate를 37℃에서 24~48시간 배양한다.7 배양한 후 나타난 집락이 하나씩 떨러져 있는 가를 관찰하고 또한 그 집락의 형태를 구분한다.{3) 혼합분주배양법(Pour plate culture)혼합분주배양은 용액내의 세균 수 측정 및 세균의 순수 분리에 이용되는 법이다.1 멸균된 nutrient agar를 45~50℃로 유지한 항온 수조에 보관한다.2 E.coil 및 S.aureus를 각각 0.5ml씩 무균적으로 꺼내어 멸균된 평판접시에 넣는다.3 여기에 항온수조에 보관하고 있던 nutrient agar를 붓고 평판접시의 뚜껑을 닫은 후 조심스럽게 평판접시를 흔들어 세균과 잘 혼합한다.4 평판접시에서 nutirent agar와 세균을 잘 혼합한 후 한천이 굳을 때 까지 실온에 방치한다.5 한천이 완전히 굳은 후 평판접시를 뚜껑이 아래로 가게 뒤집어서 37℃에 24~48시간 배양한다.4) 이원배양(two - membered culture)분리의 목적은 일반적으로 순수배양을 얻기 위한 것이다. 그러나 이것을 얻을 수 없거나 실현이 어려운 특수한 경우도 있다. 이러한 상황하에서는 단 2종류의 미생물만을 함유하는 형태로 하는 수밖에 없다. 이원배양의 원칙적으로 비루스를 배양하는 유일한 방법이다. 왜냐하면 비루스는 모두 세포성 생물들의 절댜세포내 기생체이기 때문다.

생활/환경| 2005.11.14| 5페이지| 1,000원| 조회(2,314)

미생물, 주입평판법, 희석법

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[환경]광화학반응

◆ 광화학 반응 (光化學反應 photochemical reaction) ◆1. 1차 오염물질이 대기 중에서 물리 ? 화학적 반응에 의해서 제 3 물질로 생성되는 현상.⇒ 자동차 배출가스(→ 연중균일, 증가추세), 선진국형(후기) 오염 형태uvNOX + 올레핀계 HC ─→ Oxidants + 1, 2차 오염물질(O3, PAN, 알데히드) (SOX, NOX, Dust, mist)1차 광화학반응 ← | → 2차 광화학 반응2. 광화학 스모그 (photochemical Smog)미국에서 광화학 스모그의 발생빈도가 증가하여 이에 따른 건강?재산상의 피해가 증가함에 따라 1950년대에 초반에서부터 1960년대까지 광화학 스모그에 대한 연구가 매우 활발하게 진행되었다. 스모그에 의한 악영향의 대부분이 질소산화물과 각종 탄화수소가 참여하여 광화학적으로 초기화된 반응에 의해 생성된 산화물(Oxidants)때문이라고 보고되어 있다.스모그 생성에 관여하는 각 화학반응식을 하나씩 확인하는 작업은 매우 어려우며 최근 40년간 계속 수행되어 왔으나 아직도 완벽하지 못하다. 일단 반응의 광화학적 성질을 이해하게 되면, 스모그 반응에 참여하는 모든 반응물들 중 단지 NO2 만이 광화학 해리(photochemical dissociation)를 일으킬 정도의 충분한 에너지가 제공되는 파장의 빛을 흡수함을 알 수 있다.3. 하루 중 턴화수소 및 광화학 산화제의 농도 변화(1) NO나 HC는 교통량이 증가하는 아침에 증가(2) 해가 뜨면 대기 중에 광화학 반응에 의해 NO2 가 증가(3) 오전 10시 까지 NO 농도는 감소하고 O3의 농도가 증가하기 시작하여 오후 3~4시를 기점으로 감소(4) 알데히드는 해가 뜨면 계속 증가하다 12시를 기점으로 감소4. 광화학 옥시단트(Oxidants)(1) 종류① 오존(O3)- 산화성이 크다. 마늘, 해초 냄새. 대기오염 경보제 기준 물질- 인체에 폐독성이 가장 크다.- 식물 : 생장억제, 기형유발 (지표식물: 담배(연초), 강한식물: 사과나무)- 재산 : 고무와 상극※ 대기오염 경보제 (=오존경보제(대도시))- 환경부령 ① 0.12 ppm ↑ : 주의보 - 자제요청 : 주민, 자동차② 0.3 ppm ↑ : 경보 - 제한요청 : 연료감축권고③ 0.5 ppm ↑ : 중대경보 - 금지, 명령 : 조업단축명령⇒ 1개소 이상 초과시 발령 (방송매체, 인터넷)→ 발령지역, 경보단계(농도), 경보단계별 조치사항, 시도지사가 필요하다고 인정하는 사항- 경보단계별 조치사항① 주민 : 실외활동 ②자동차 : 사용, 운행 ③ 사업장 : 조업, 연료② PAN(Peroxy Acetyl Nitrate)- NoX + HC + O3- 휘발성이 큰 액체물질- 식물 : 은색, 청동색으로 변색 유발(지표식물: 강낭콩, 강한 식물: 사과나무)③ RCHO : 실내오염물질, 자극성, 알레르기 유발물질, 석유?화학제품에서 발생④ 과산화수소(H2O2), PBN(Peroxy Benzoyl Nitrate), PPN(Peroxy Propiony Nitrate)등5. 광화학 대기질에 영향을 미치는 주요 인자(1) NOX와 VOCS 배출(인위적 및 생물학적 배출)(2) 배출된 VOCS 및 NOX의 농도 비율(3) 바랑장(wind field)의 시공간적 변화(4) NOX, VOCS 및 기타 화학종의 화학반응(5) 태양복사와 온도의 변화(6) 건성침적(dry deposition)에 의한 오존과 오존 전구물질(precursor)의 감소(7) 대상지역의 충상 반향에서의 NOX, VOCS 및 전구물질 등의 유입농도 및 배경농도※ 건성침적(dry deposition) : 입자상, 가스상 오염물질리 토양이나 수면에 부착되어 제거 되는 대기의 자정작용습성침작(wet deposition) : 입자상, 가스상 오염물질이 빗방울이나 안개방울 등의 액적 에 흡착되어 제거되는 대기의 자정작용

생활/환경| 2005.11.14| 3페이지| 1,000원| 조회(720)

광화학스모그, 광화학반응, 옥시단트

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