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구강 상피세포로부터 gDNA 추출 실험2025.11.181. Genomic DNA (gDNA) Genomic DNA는 유전체를 구성하는 긴 DNA 서열로 개체의 모든 유전 정보를 포함한다. 진핵세포의 gDNA는 세포핵 내에 위치하며 긴 선형 구조를 가진다. 플라스미드 DNA와 달리 원형 구조가 아닌 선형 구조이며, 개체의 생명현상에 필요한 모든 유전 정보를 포함할 수 있다. 염색체를 구성하는 DNA로서 세포 내 유전 정보의 주요 저장소 역할을 한다. 2. 동물 세포의 구조 동물 세포는 핵, 세포질, 리보솜, 소포체, 골지체, 리소좀, 미토콘드리아, 중심립 등 다양한 소기관으로 구성된다....2025.11.18
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DNA 추출 및 PCR, PCR 결과 확인(전기영동) 레포트2025.04.251. DNA 추출 DNA 추출 과정에서 Vortexing이나 Tapping을 하지 않고 Inverting하는 이유는 고분자인 gDNA에 물리적인 힘이 크게 가해져 gDNA의 손상이 일어나는 것을 방지하기 위해서이다. gDNA 전기영동 결과에서 Clean band가 나오지 않은 이유는 gDNA가 크기가 무척이나 크기 때문에 일련의 실험 과정에서 많이 부서져 부서진 조각들의 크기가 다양하여 전기영동 시 clean band가 나오지 않고 번진 형태로 나타났기 때문이다. 2. PCR PCR product의 전기영동 결과를 보면 500~60...2025.04.25
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[생명공학 레포트] gDNA isolation 및 T7E1 assay를 통한 genome editing 확인2025.05.031. gDNA isolation gDNA는 plasmids와 같은 extra-chromosomal DNAs와는 다르게 chromosomal DNA를 의미한다. gDNA를 분리하는 단계에서는 cell과 CLS(Cell Lysis Solution), proteinase K를 섞어 DNA 추출을 위해 cell을 파괴하는 역할을 한다. CLS에는 SDS, Tris-HCl, EDTA 등이 들어가 있으며, SDS는 cell membrane의 lipid를 제거하고, Tris-HCl은 pH 변화를 방지하며, EDTA는 세포 내의 DNases의 역...2025.05.03
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세포배양, DNA, RNA 추출 실험2025.11.141. 세포배양 (Cell Culture) 세포배양은 자연환경 외부의 통제된 조건에서 세포가 성장하는 과정이다. HEK 293T cell은 부착성 세포로 plate 바닥에 붙어 자라며, 계대배양을 통해 세포를 유지한다. Trypsin-EDTA를 사용하여 세포를 분리하고, 배지를 교체하며 세포를 배양한다. 세포는 초기 3일간 지연기를 거친 후 증식을 시작하여 plate를 채우고, 영양분 부족으로 정상기에 도달한 후 사멸기에 진입한다. 2. Genomic DNA 추출 (gDNA Isolation) Genomic DNA 추출은 세포용해, ...2025.11.14
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HEK293T 세포 계대배양 및 핵산 추출 실험2025.11.171. HEK293T 세포 계대배양 HEK293T 세포는 SV40 T 항원을 발현하는 형질전환 세포로, 높은 단백질 발현을 유도한다. 계대배양은 trypsin-EDTA를 이용하여 세포를 배양용기에서 분리하고, centrifuge로 세포를 수집한 후 새로운 배지에 옮기는 과정이다. 세포는 부착단백질과 결합할 때 길게 늘어난 형태를 보이다가, trypsin 처리 후 구형으로 변한다. 8일간의 배양 관찰 결과 시간이 지날수록 배지에 세포가 증식하여 빈 공간이 감소하는 것을 확인할 수 있다. 2. Genomic DNA 추출 Genomic D...2025.11.17
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플라스미드 DNA 추출 및 전기영동 실험2025.11.181. 플라스미드 DNA 플라스미드는 세균의 세포 내에 염색체와 별개로 존재하면서 독자적으로 증식할 수 있는 DNA 분자이다. 생장에 필수적인 유전자는 아니지만 특정 환경에 생존하기 위해 중요한 기능을 수행한다. 유전공학에서 제한효소로 끊은 후 필요한 유전자를 삽입하여 유전자재조합 기술에 광범위하게 이용된다. 1kb에서 1Mb의 다양한 크기로 존재하며 대부분 환형이고, 세포에서 분리한 플라스미드는 초나선형으로 존재한다. 2. DNA 추출 및 정제 방법 E.coli 세균으로부터 플라스미드를 추출하기 위해 여러 버퍼를 순차적으로 사용한다...2025.11.18
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Genome editing / knockout 벡터 확립 및 도입2025.05.031. Genome Editing Genome Editing은 생명체의 특정 염기서열을 교정하거나 편집하는 기술을 의미한다. 이러한 Genome editing 기술에는 과거부터 이용되었던 Zinc finger nucleases나 TALEN을 이용하는 방법이 있었으나 현재는 높은 정확도와 효율성을 갖추고, 비교적 쉽게 디자인할 수 있는 기술인 CRISPR을 주된 tool로써 사용하고 있다. CRISPR/Cas9 기술은 효소가 절단하는 부분의 염기서열을 guide RNA(gRNA)로서 인위적으로 제공해주어 원하는 부분의 DNA를 절단하도...2025.05.03