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[약학실습 A+] 단백질 분리 정제 결과레포트2025.01.181. 단백질 분리 정제 본 실험에서는 Size Exclusion Chromatography 기법을 이용하여 BSA와 Lysozyme으로 구성된 단백질 혼합 샘플을 분리 정제하였다. FPLC 장비를 사용하여 분리된 단백질 분획을 수집하고, UV spectroscopy를 통해 각 분획의 농도를 측정하여 수득률을 계산하였다. 실험 결과, BSA의 수득률은 24%, Lysozyme의 수득률은 16.16%로 나타났다. 이는 일반적으로 기대되는 90% 이상의 수득률에 크게 미치지 못하는 수준으로, 시간이 지나면서 단백질 구조가 분해되었기 때문...2025.01.18
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[생화학실험]단백질 분리정제 및 기능분석 - buffer 만들기2025.05.051. 단백질 분리정제 및 기능분석 이 실험에서는 단백질 분리정제 및 기능분석을 위한 준비 과정으로 buffer를 제조하는 방법을 다룹니다. Buffer는 pH 변화에 영향을 받지 않는 용액으로, 생체반응에서 생성되는 산과 염기를 흡수할 수 있습니다. 실험에서는 1M Tris-HCl (pH 7.4), NaCl, MgSO4 stock solution을 제조하고, 이를 이용해 다양한 NaCl 농도의 elution buffer를 만드는 과정을 설명합니다. 또한 pH 미터기 사용법과 주의사항, 그리고 alkaline phosphatase 정...2025.05.05
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생명과학실험1 단백질 정제 및 기능 분석을 위한 DEAE sepharose anion exchange chromatography2025.01.171. 단백질 정제 이 실험에서는 E.coli에서 추출한 alkaline phosphatase(AP) 단백질을 DEAE sepharose anion exchange chromatography를 이용하여 정제하는 과정을 다루고 있습니다. AP는 E.coli의 outer membrane과 inner membrane 사이에 존재하는 periplasmic space에 위치하며, osmotic shock을 통해 추출할 수 있습니다. 추출된 AP 단백질 혼합물은 열처리, 투석, ion exchange chromatography 등의 과정을 거쳐...2025.01.17
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SDS-PAGE2025.01.121. SDS-PAGE SDS-PAGE는 단백질을 분리하는 기술로, 전기영동 이동성을 이용한다. 단백질은 SDS 처리를 통해 균일하게 음전하를 띠게 되어 분자량에 따라 분리될 수 있다. 이 실험에서는 단백질 발현에 IPTG의 영향을 확인하고자 하였으나 이전 실험 결과의 불확실성으로 인해 IPTG의 영향을 명확히 알기 어려웠다. 단백질 염색 결과를 통해 약 45 kDa 크기의 단백질이 분리된 것을 확인할 수 있었다. 2. Discontinuous Buffer System Discontinuous buffer system은 stackin...2025.01.12
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A+ 생화학실험 <13주차. His6-tagged Protein Purification> 레포트2025.01.201. 단백질 정제 단백질 정제(Protein Purification)는 생물학적 연구 및 산업적 응용을 위하여 단백질을 혼합물로부터 분리하고 정제하는 과정이다. 이 과정은 일반적으로 여러 단계를 거치며, 각 단계에서는 단백질의 용해도, 크기, 전하, 결합 친화도 등의 단백질 간 서로 다른 특성을 활용하여 단백질을 분리한다. 첫 번째 단계는 세포 용해(Cell Lysis)로, 세포벽을 파괴하여 세포 내의 단백질을 방출하는 것이다. 다음 단계는 affinity chromatography이다. 이 방법은 특정 단백질에 결합하는 리간드를 ...2025.01.20
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프로테오믹스 기법을 이용한 파골세포 활성 단백질 탐색2025.01.121. 파골세포의 활성 조절 파골세포는 뼈를 분해하는 역할을 하며, 이들의 활성은 호르몬 변화나 염증에 의해 촉진됩니다. 연구 결과, 파골세포 내의 CK-B 단백질이 이 세포의 활성을 조절하며, CK-B 단백질을 억제하면 뼈의 파괴를 막을 수 있다는 사실이 밝혀졌습니다. 2. 프로테오믹스 기법 프로테오믹스는 수백, 수천 개의 단백질을 한꺼번에 분석할 수 있는 방법입니다. 이를 위해 단백질 분리 정제 기법, 단백질 성상 분석 방법, 생물정보학을 이용한 정보 통합 등의 기술이 사용됩니다. 이를 통해 복잡한 생명 현상을 단백질 수준에서 이...2025.01.12
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산성탈인산가수분해효소의 분리 및 정제 결과보고서2025.01.231. 산성 탈인산가수분해효소 이 실험의 목적은 세포 또는 조직(맥아)으로부터 산성 탈인산가수분해효소를 추출하고 정제하여 효소 활성도를 측정하는 것입니다. 산성 탈인산가수분해효소는 주로 리소좀에서 작용하며 다양한 생리적 과정에서 중요한 역할을 합니다. 이 효소는 특정 기질(PNPP)로부터 인산기를 떼어내는 가수분해 반응을 촉매합니다. 실험에서는 원심분리와 여과를 통해 효소를 포함한 상층액을 분리하고, MgCl2와 (NH4)2SO4를 이용한 염석 효과로 효소를 정제하였습니다. 2. 원심분리기 사용 원심분리기 사용 시 주의할 점은 로터의...2025.01.23
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이화여대 생명과학실험 A+ 리포트(DEAE sepharose anion exchange chromatography)2025.01.231. Column chromatography 크로마토그래피는 주어진 시료 중 정량 분석하고자 하는 성분을 분리하고 확인하는 수단으로, 여러 다른 화합물들이 상이한 두 가지 phases 간에 분포되어 있거나 어느 물질 내의 분리 가능한 부위들 사이에 분포되어 있을 때 그 분포된 정도가 화합물들끼리 서로 다르다는 사실에 기초한 방법이다. 한 가지 상은 정지상(stationary phase)이고 다른 상은 이동상(mobile phase)이다. 이동상은 정지상을 일고 있는 물질 위로 흐르는데, 분리될 시료는 이 이동상을 따라 운반된다. 시...2025.01.23
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Ion Exchange Column Chromatography2025.01.211. Alkaline Phosphatase (AP) Alkaline Phosphatase (AP)는 인산기(phosphate group)을 떼어내는 기능을 하며, alkaline condition에서 활성을 띠는 특징을 가진다. AP는 E. coli의 outer membrane과 inner membrane 사이의 periplasmic space에 존재한다. 2. Protein Purification AP를 정제하기 위해 osmotic shock, centrifuge, dialysis, heat inactivation 등의 과정을 거...2025.01.21
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Protein electro-transfer and Western blot 실험보고서2025.01.161. Western blot Western blot은 찾고자 하는 protein의 antigen epitope와 반응하는 antibody를 이용하여 단백질 혼합물 중에서 원하는 단백질(antigen)을 찾아내는 방법이다. 전기 영동을 이용하여 단백질을 gel 상에서 크기에 따라 분리한 후, membrane에 transfer한다. Membrane에 발광하는 probe가 붙어 있는 antibody를 붙여주는 항원-항체 반응을 이용하여 찾고자 하는 특정 단백질을 검출한다. 2. Nitrocellulose membrane Nitrocell...2025.01.16
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